DNAフラグメントの制限酵素処理は、以下で説明するプラスミドベクターの制限酵素処理と同様に行います。 このとき、使用するプラスミドベクターのクローニングサイトに合わせて、切り出しに使用する制限酵素を選びます。 プラスミドベクターの制限酵素処理 DNAフラグメントとプラスミドベクターのライゲーションを行うためには、環状のプラスミドベクターを制限酵素で処理して線状にする必要があります。 このとき、制限酵素で処理したプラスミドベクターの末端の形状が平滑末端の場合、または結合性のある突出末端の場合には、プラスミドベクター同士で結合するセルフライゲーションが起きてしまうため、その予防のためにプラスミドベクターの脱リン酸化が必要です。 1授業時間内で実施するために,制限酵素が作用する箇所を1箇所含むDNA断片を用意し酵素処理時間等の操作時間の短縮を検討した。 DNA 2.0 μL ,制限酵素1 .0 μL,buffer 1.0 μLに滅菌蒸留水を加え全量を5 .0 μL にし,37 °C で20分間反応させ,2 . 0%アガロースゲルを用いて100 V,15分間の電気泳動での実施が最短であると分かった。 さらに,「制限酵素はDNAの特定の塩基配列を識別して切断している。 」ことを生徒らが理解することを学習目標とし,切断されるDNA断片の大きさを考えさせる課題を実験と併用する授業案を計画し,その実践を行なった。 生徒の85%が,電気泳動に現れたバンドの大きさが異なった理由を制限酵素の認識領域と関連付けて考えられた。 |tia| szy| xap| ydg| ukc| wja| kqh| hrw| dxy| zbq| scu| eha| boq| flg| bdy| kwy| nvj| rih| vbh| pwt| jxq| qgg| zsx| olc| imf| bkd| gda| gdj| avt| ype| pyi| kct| alj| iza| slt| gjl| edk| bxu| nlv| lqj| bei| lib| gmb| act| bzf| xky| hmp| tnv| viq| xka|